一、分光光度计是测什么的
分光光度计,又称光谱仪(spectrometer),是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性或定量分析。常用的波长范围为:200~380nm的紫外光区,380~780nm的可见光区,2.5~25μm(按波数计为4000cm~400cm)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
二、光谱仪和分光光度计区别
“光谱仪”和“分光光度计”是同一类仪器,但是“光谱仪”的名称之前是不需要冠之以“分光”的,因为要想得到光谱,就必须分光。光度计可以是积分光度计(光强计),不需要分光;一旦分光,它就是“光谱仪”。另外,“光谱仪”和“分光光度计”的结构区别是:“光谱仪”分光不需要扫描(如CCD光谱仪),工作速度快;“分光光度计”分光需要扫描,工作速度慢。
三、分光光度计的组成部分
1、光源
在吸光度的测量中,要求光源发出的所需波长范围内的连续光谱具有足够的光强度,并能在一定时间内保持稳定。
2、单色器
单色器是能将光源发射的连续光源分解为单色光并从中选出任一波长单色光的光学系统。它由入射狭缝、准光器、色散原件、聚焦元件和出射狭缝等几个部分组成。
3、吸收池
吸收池又称比色皿,用于盛装参比溶液和待测试液。仪器一般配有液层厚度为0.5cm、1cm、2cm、3cm等的长方形比色皿。
4、检测系统
检测系统通常通过利用光电效应将透过吸收池的光信号转变为可测的电信号,而且所产生的电信号应与照射于检测器上的光信号成正比。可见分光光度计常常使用光电管或光电倍增管做检测器。
5、信号显示系统
光电转换器产生的各种电信号,经放大等处理后,用一定方式显示出来,以便于计算和记录。
四、分光光度计原理
分光光度计的原理是采用一个可以产生多个波长的光源,通过系列分光装置,从而产生特定波长的光源,光线透过测试的样品后,部分光线被吸收,计算样品的吸光值,从而转化成样品的浓度,样品的吸光值与样品的浓度成正比。
五、分光光度计的种类
1、可见分光光度计
用来测量待测物质对可见光的吸光度并进行定量分析的仪器,称为可见分光光度计。
2、紫外可见分光光度计
紫外可见光谱仪用来测量待测物质对可见光或紫外光(200-760nm)的吸光度并进行定量分析的仪器,可以测定核酸和蛋白的浓度,也可以测定细菌细胞密度。
3、红外分光光度计
一般的红外光谱是指大于760nm的红外光谱,这是研究有机化合物最常用的光谱区域,能分析各种状态(气、液、固)的试样。
4、荧光分光光度计
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器,应用于科研、化工、医药、生化、环保以及临床检验、食品检验、教学实验等领域,通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化,从而阐明分子结构与功能之间的关系。
六、分光光度计使用步骤方法
1、接通电源,打开仪器开关,掀开样品室暗箱盖,预热10分钟。
2、将灵敏度开关调至“1”档(若零点调节器调不到“0”时,需选用较高档。)
3、根据所需波长转动波长选择钮。
4、将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处,用擦镜纸擦清外壁,放入样品室内,使空白管对准光路。
5、在暗箱盖开启状态下调节零点调节器,使读数盘指针指向t=0处。
6、盖上暗箱盖,调节“100”调节器,使空白管的t=100,指针稳定后逐步拉出样品滑竿,分别读出测定管的光密度值,并记录。
7、比色完毕,关上电源,取出比色皿洗净,样品室用软布或软纸擦净。
七、分光光度计使用注意事项
1、该仪器应放在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风,防止灯泡灯丝发亮不稳定。
2、使用本仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查,电源接线应牢固,通电也要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再按通电源开关。
3、在仪器尚未接通电源时,电表指针必须于“0”刻线上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调节。